Problemas de sellado y contaminación en placas de cultivo de células múltiples

Carga y manejo de placas de cultivo de células múltiples:

La placa de cultivo celular también sigue el principio de asepsis estricta al realizar operaciones celulares. Todas las operaciones deben estar estandarizadas y científicas, y no causarán un impacto adicional en el crecimiento celular. El problema más común es cómo garantizar la uniformidad de las células después de agregar la muestra y minimizar el impacto de cambiar el medio en el estado de crecimiento de las células.

preguntar:
Las tapas de las placas de cultivo de 96 y 24 pocillos o platos de Petri son muy flojos, lo cual es conveniente para la ventilación, pero ¿también se deslizarán las bacterias, el moho y otros contaminantes?

respuesta:
La tapa está muy floja, que pertenece a la cultura semi-abierta, y el propósito de esto es ventilar (de hecho, es hacer que el CO2 fuera de la placa de cultivo se intercambie completamente con el plato de cultivo y mantener el valor de pH de la cultura. medio).
Todo tiene ventajas y desventajas, lo que, por supuesto, aumenta la posibilidad de contaminación. Además, esto hace que el líquido en el plato se evapore, lo que es notable por la dosificación precisa de las drogas. Por lo tanto, son necesarias las siguientes dos medidas: a. El aire en la incubadora debe estar limpio (luz ultravioleta regular, fregado de alcohol y la incubadora debe abrirse y cerrarse lo menos posible) b. La humedad en la incubadora siempre debe mantenerse al 100% (el fregadero con agua destilada estéril colocada en la incubadora).
Al igual que una placa de Petri, también es un recipiente con una tapa al revés, y no estará contaminada. Principalmente debido a la presión negativa del flujo de aire generado por el borde "L" de la cubierta, hay microorganismos unidos al polvo, y el polvo transportado por el flujo de aire no puede pasar a través del borde de la cubierta que genera presión negativa. El efecto de ventilación es solo a través de la difusión del aire, y no se generará un flujo de aire, por lo que solo respirará y no penetrará bacterias.

preguntar:
Usando una placa de 24 pocillos, hay operaciones en algunos de los pozos (en el banco ultra limpio), y hay células para cultivar en otros pozos. Me preocupa que esto cause contaminación. ¿No sé a qué prestar atención?

respuesta:
Si la operación está estandarizada en el banco ultra limpio, debería estar bien. Creo que puede hacer uso completo de la cubierta de la placa de cultivo, tratar de exponer solo los agujeros que se operarán y cubrir los otros agujeros con cubiertas.
Considere de manera integral antes de su uso y haga uso completo de todos los agujeros; Si solo necesita usar algunos agujeros, puede usar solo un lado y cubrir el resto con una cubierta. Estoy acostumbrado a usar primero el orificio derecho (es conveniente agregar muestras a la mano derecha).

Cuando funcione, use algunos portaobjetos de vidrio para elevar un lado de la placa, no abra la cubierta por completo, generalmente no hay problema.
Distribución y soluciones de células desiguales

preguntar:
Las células se inoculan en la placa de cultivo, y las células siempre se reúnen en la parte periférica, ¿cómo lidiar con ella?

respuesta:
¿Puedo preguntar cómo se mezclan sus células? ¿Es pipeteo o sacudiendo la placa de cultivo? Si es lo último, y si se agita en un círculo, es muy probable que las células sean arrojadas a la parte periférica debido a la fuerza centrífuga, lo que resulta en menos células en el medio. ¡Más de cuatro semanas!
Aquí hay una buena manera: antes de cultivar la placa de semilla, coloque la placa de cultivo en la incubadora durante unas pocas horas de saturación y luego sáquela. La fuerza debe ser ligera al plantar las células. Agregar lentamente permite que la suspensión celular fluya hacia los pozos de la placa, y las células cultivadas básicamente crecen uniformemente. Recuerde nunca temblar con un agitador, o sus células se agrupen como usted dijo.
Cuanto más pequeño sea el diámetro del agujero de la placa de cultivo, más obvio es este fenómeno. Este fenómeno es inevitable para placas de 24 y 96 pocillos, porque el líquido se adhiere a la pared para que la solución de cultivo en el pozo no forme un nivel de líquido, pero la periferia es alta, al igual que un espejo cóncavo. Sin embargo, cuando se usa estos dos tipos de placas de orificio, no es posible agregar una cantidad suficiente de solución de cultivo debido a la necesidad de una intervención adicional, de modo que las células aparezcan "colección de borde" junto con la solución de cultivo. Depende de los indicadores que necesite observar. Si es MTT, la inmunohistoquímica afectará los resultados debido a las capas celulares.
Al digerir las células, preste atención a la pipa de manera uniforme para evitar los grupos de células, y la cantidad de solución de cultivo en el pozo debería ser suficiente. En general, agregue suficiente solución de cultivo al inocular y cambie la solución una vez al agregar intervención. La cantidad de solución de cultivo agregada a la solución de intervención es igual a la cantidad de solución de cultivo en el momento de la inoculación, en este caso, se mejorará el fenómeno del "conjunto de borde", por lo que podría probarlo.

preguntar:
Lo que hice fue el experimento de formación de placa. Es mejor extender las células en una capa uniforme. La mayoría de los agujeros están bien cuando el virus está inoculado, y algunos de ellos no son uniformes. Hay grandes diferencias en el grupo celular. Me gustaría preguntarle qué método usa al agregar celdas.

respuesta:
¡Es fundamental pipetear las células en una suspensión de una sola célula después de la digestión! ¡Asegúrese de que el número de celdas en cada pozo sea consistente al dividir la placa!
Por supuesto, también hay factores de procesamiento. El paralelismo entre los pozos también es muy importante. Por ejemplo, al agregar medicamento, mezcle el medicamento después de la dilución para asegurarse de que la concentración de cada pozo sea consistente.
Además, al agregar células y fármacos, el grupo de prueba y el grupo de control deben agregarse a su vez para evitar la diferencia en la densidad celular y la concentración de fármacos causadas por la secuencia de agregar muestras.

preguntar:
El soplado ya es uniforme, pero el tablero, 6 hoyos y 24 hoyos siempre son algo desiguales y un poco concentrados en el medio. Además, es obvio que el conteo se realiza, y después de un día o dos, la densidad de cada hoyo es diferente, lo que afectará la detección. ¿Hay una buena manera?

respuesta:
Si usa una pipeta Pasteur, no chupes demasiado cada vez, porque las celdas de la pipeta se hundirán automáticamente, a menudo el número de celdas en los primeros agujeros es grande, y la suspensión de la celda a menudo es uniforme, y el líquido Sigue la ruta en forma de S.
Si usa una pipeta, las puntas deben procesarse y retirarse para evitar dañar las células, de modo que cada vez que se tome el líquido corresponde a un pozo. Es más preciso agregar un agujero uno a uno con la punta. Pero también presta atención a mezclar la suspensión.

Para configurar un grupo paralelo, N debe ser lo suficientemente grande (puede calcularlo).

No se agite después del enchapado, ya que el sacudido hará que las células se agregen hacia el centro. Es mejor complicar una vez.

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