Explicación detallada de la volatilización de reactivos en experimentos de PCR

Explicación detallada de la volatilización de reactivos en experimentos de PCR.

En el experimento de PCR, después de agregar el sistema de reacción, cubrimos cuidadosamente la tapa y confirmamos repetidamente que la tapa está cerrada para evitar la volatilización de reactivos. Pero a veces también tenemos dudas: hemos confirmado que la tapa está muy cerrada, pero después de que se complete el experimento, el reactivo aún se evaporará. ¿Cuál es la razón?

De hecho, la volatilización de reactivos es uno de los problemas más comunes en los experimentos de PCR, y hay muchos factores que afectan la volatilización de reactivos.

La evaporación se refiere a la que durante el experimento de PCR, la solución de reacción se evapora a alta temperatura, y luego se condensa en la pared de la botella o la cubierta superior para formar gotas de niebla de agua o agua, o se desborda directamente del espacio de aire de la tapa o película de la botella, lo que resulta en lo que resulta. en un cambio en la concentración de la solución de reacción. Los cambios, la cantidad de solución de reacción disminuyó, y algunos incluso se evaporaron a la sequedad, lo que resultó en experimentos no válidos.

1. Presión de la tapa caliente, temperatura

En los experimentos de PCR, generalmente calentamos la tapa para evitar la condensación del vapor de reactivo. La temperatura de la tapa calentada suele ser más alta que la de la solución de reacción para evitar la condensación de los vapores.

Las tapas de calentamiento del ciclador térmico se pueden dividir aproximadamente en los siguientes cuatro tipos: tapas de calentamiento no ajustables, tapas de calentamiento ajustables, tapas de calentamiento adaptativas y tapas de calefacción automáticas. La tapa calentada ajustable presenta compresión ajustada con los dedos. Si no se apretan firmemente, los reactivos se evaporarán. La evaporación del borde se puede minimizar aumentando la presión sobre la tapa calentada. A veces, la observación abierta puede pellizcar el tubo y torcer la perilla. En circunstancias normales, la cubierta de calefacción inteligente eléctrica puede detectar automáticamente consumibles de diferentes alturas, comprimir automáticamente los consumibles, y la presión es uniforme y constante, reduciendo así la evaporación de reactivos y los errores manuales, y mejorando la precisión experimental y la repetibilidad.

2. Deformación de consumibles

Para las fugas de vapor, la mayoría de la gente piensa que la presión de la tapa caliente no es suficiente. La presión de la tapa caliente es muy importante, pero ese es solo un aspecto. De hecho, los consumibles también son muy importantes.

Las placas de orificio de PCR generalmente están hechas de materiales plásticos, que se expanden y se deforman enormemente después de ser calentadas. La tasa de expansión térmica de la base metálica de PCR utilizada para colocar la placa de orificio de PCR es extremadamente baja, y la placa de orificio de PCR no puede expandirse normalmente a lo largo del plano después de la expansión térmica. El estado abultado hace que la cubierta de calor superior no pueda contactar completamente la superficie de la placa de orificio de PCR, lo que resulta en temperatura y presión desiguales, causando evaporación de reactivos en el borde de la placa de orificio de PCR y afectando el efecto de detección de PCR.

3. Los consumibles no están bien sellados

La opresión de la tapa térmica y los consumibles no significa que la tapa del tubo de PCR esté bien cerrada, y la calidad de la placa del pozo PCR es desigual. Los consumibles de alta calidad, la superficie de la boquilla y la cubierta son lisas, y el sello detrás de la cubierta de la caja es bueno, y no es fácil de filtrar. Los consumibles inferiores tienen boquilla y líneas radiales desiguales, lo que puede causar fácilmente fugas o incluso secarse.

Por lo tanto, en los experimentos de PCR, trate de elegir consumibles de alta calidad y adecuados. Al mismo tiempo, el sistema de reacción se puede ampliar para minimizar la influencia de la evaporación del sistema en la reacción.