Selección y uso de placas de cultivo celular

Selección y uso de placas de cultivo celular

El principio de esterilidad estricta en la realización de operaciones celulares también se aplica a las placas de cultivo celular. Todas las operaciones deben estar estandarizadas y científicas, sin efectos adicionales sobre el crecimiento celular. Uno de los problemas más comunes es garantizar la uniformidad de las células después de la adición de la muestra y minimizar los efectos del cambio medio en el estado de crecimiento de las células.

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La tapa está muy floja y es parte de una cultura semiabierta. Esto es para la aireación (en realidad para que el CO2 fuera de la placa de Petri se pueda intercambiar completamente con la placa de Petri para mantener el pH del medio).

Todo tiene ventajas y desventajas, lo que, por supuesto, aumenta la posibilidad de contaminación. Además, esto hace que el líquido en la placa de Petri se evapore, que es notable por la dosificación precisa de las drogas. Por lo tanto, las siguientes dos medidas son necesarias a. El aire en la incubadora debe estar limpio (luz UV regular, fregado de alcohol y encender y apagar la incubadora lo menos posible) b. La humedad en la incubadora siempre debe mantenerse al 100% (se coloca un tanque de agua con agua destilada estéril en la incubadora).
Al igual que una placa de Petri, también es un recipiente con una tapa al revés y no se contaminará. La razón principal es que el borde en forma de "L" de la cubierta genera presión de aire negativa para que los microorganismos se unan al polvo, y el polvo transportado por el flujo de aire no puede pasar a través del borde de la cubierta que genera la presión negativa. El efecto de ventilación es solo a través de la difusión del aire, y no se generará ningún flujo de aire, por lo que solo respirará y no penetrará bacterias.

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Usando una placa de 24 pocillos, en algunos de los pozos, hay manipulaciones (dentro del banco), mientras que otros pozos todavía tienen células para crecer. Me preocupa la contaminación de esta manera, no sé qué tener en cuenta.

Responder:
En el banco ultra limpio, si la operación está estandarizada, debería ser posible. Creo que puede hacer uso completo de la cubierta de la placa de cultivo, tratar de exponer solo los agujeros que se operarán y cubrir otros agujeros con cubiertas.
Considéralo exhaustivamente antes de su uso y haga uso completo de todos los agujeros; Si solo necesita usar algunos agujeros, puede usar solo un lado y cubrir el resto con una tapa. Estoy acostumbrado a usar el orificio derecho primero (la mano derecha es conveniente para agregar muestras).
Cuando funcione, use algunos portaobjetos de vidrio para elevar un lado de la placa, no abra la tapa por completo, generalmente no hay problema.

Distribución desigual de células y soluciones.

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Cuando las células se sembran en una placa de cultivo, las células siempre se reúnen en la parte periférica, ¿qué debo hacer?

Responder:
¿Cómo se mezclan sus células? ¿Es pipeteo o sacudiendo el plato? Si es lo último, y si se agita en un círculo, es muy probable que debido a la fuerza centrífuga, las células se arrojen a la parte circundante, lo que resulta en menos células en el medio y más.

Aquí hay una buena manera: antes de cultivar la placa de semilla, coloque la placa de cultivo en la incubadora durante unas pocas horas de saturación y luego sáquela. Al sembrar las células, la fuerza debe ser ligera. Agregue lentamente para permitir que la suspensión celular fluya hacia los pozos de la placa, y las células cultivadas crecen de manera sustancial de manera uniforme. Recuerde nunca sacudir el oscilador o sus células se agrupen como usted dijo.

Cuanto más pequeño sea el diámetro del agujero de la placa de cultivo, más obvio es este fenómeno. El fenómeno de las placas de 24 y 96 pocillos es inevitable porque la pared del líquido hace que el medio de cultivo en el agujero no sea un nivel de líquido, pero la periferia es alta, al igual que un espejo cóncavo, sin embargo, debido a la necesidad de intervención Y otras razones, el uso de estos dos tipos de placas de pozos no puede agregar suficiente medio de cultivo, de modo que las células parecen "agregación de borde" junto con el medio de cultivo. Dependiendo del tipo de indicadores que deba observar, si es MTT, la inmunohistoquímica afectará los resultados debido a las capas celulares.

Al digerir las células, preste atención a la pipa de manera uniforme para evitar el agrupamiento celular, y la cantidad de medio de cultivo en los pozos debería ser suficiente. En general, se debe agregar una cantidad suficiente de medio de cultivo durante la inoculación, y el medio debe cambiarse una vez cuando se agrega la intervención. , en este caso, se mejorará el fenómeno del "conjunto de borde", así que pruébalo.

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Lo que estoy haciendo es el experimento de formación de placa. Es mejor propagar las células en una capa uniforme, pero la mayoría de los agujeros están bien al inocular el virus y algunos no son uniformes. Hay grandes diferencias dentro del grupo celular. Me gustaría preguntarle qué métodos tiene al agregar celdas.

Responder:
Después de la digestión celular, ¡la pipa en una suspensión de una sola célula es crítico! ¡Asegúrese de que el número de celdas en cada pozo sea el mismo cuando se divide!
Por supuesto, el paralelismo entre los pozos del factor de procesamiento también es muy importante. Por ejemplo, al agregar medicina, el medicamento debe diluirse y mezclarse para garantizar que la concentración de cada pozo sea consistente.
Además, al agregar células y fármacos, el grupo de prueba y el grupo de control se deben agregar a su vez para evitar la diferencia en la densidad celular y la concentración de fármacos causadas por la secuencia de adición de muestra.

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El soplado ya es uniforme, pero el tablón, 6 hoyos y 24 hoyos siempre son un poco desiguales, y están un poco concentrados en el medio. Y está claro que el conteo se realiza, y la densidad de cada hoyo es diferente después de un día o dos, lo que afectará la detección. ¿Hay una buena estrategia?
Responder:
Si usa una pipeta de transferencia, no chupe demasiado cada vez, porque las celdas de la pipeta se hundirán automáticamente, y a menudo hay muchas celdas en los primeros pozos, y la suspensión de la celda a menudo es uniforme, y se agrega el líquido. para ir en forma de S ruta.

Si se usa una pipeta, las puntas deben manejarse y las puntas deben retirarse para evitar dañar las celdas para que cada pipeta corresponda a un pozo. Es más preciso agregar agujeros uno a uno con una punta. Pero también presta atención a mezclar la suspensión. Para configurar un grupo paralelo, N debe ser lo suficientemente grande (se puede calcular). No se agite después del enchapado, ya que el sacudido puede hacer que las células se agregen hacia el medio. Es mejor hacerlo todo a la vez.